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本试剂盒用于从哺乳动物组织及培养细胞中提取膜蛋白，核蛋白和胞质蛋白，提取制备过程简便。制备的膜蛋白，核蛋白和胞质蛋白能保持天然活性并且纯度较高。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(Gel shift Assay)、免疫共沉淀、Western Blotting和酶活性测定等后续蛋白质研究同时可用于培养细胞或动物组织中蛋白质的提取。每次可以处理10⁷个细胞或200mg的动物组织，可以使用50次。

• 提取的蛋白最大限度地保持活性，可以用于Pull Down,EMSA,IP,Enzyme Activity Assay等实验。
  
• 试剂盒内含有的蛋白酶和磷酸酶抑制试剂可以避免蛋白质的酶解及预防蛋白质磷酸化状况被破坏。
  
• 整个实验过程只需要1h左右，无需要超速离心，可以并行处理多个样本。
  
• 即可以用于培养细胞(50×10⁷个)，也可以用于动物组织(50×200mg)蛋白质的提取。

• 所有的试剂及器具均需预冷后使用，以保证蛋白质的完整性，细胞或组织量需达到要求。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 因为不同蛋白质和不同的实验，所需要的缓冲体系不同，提取后的蛋白质样品，特别是核蛋白，如有必要可透析除去其它一些盐份。
  
• 可以使用(GS1466)Sephadex重力型脱盐柱脱盐或将缓冲液替换为实验所需要的目的蛋白质的合适缓冲液。
  
• 对提取的膜，核，胞质蛋白，可以采用我公司生产的非干扰型蛋白质浓度定量试剂盒(GS1485)或改良型Lowry法蛋白质浓度定量试剂盒(GS1487)或改良型BCA法(GS1483)对提取样品中的蛋白质进行定量。
  
• 如果用于蛋白质质谱研究，请用我司生产的铜染(GS1532)或锌染(GS1534)或质谱用快速银染试剂盒(GS1419)对胶上的蛋白质进行染色，这些染色方法对蛋白质没有修饰作用，所以对质谱图没有影响。对于一般的染色，可以采用无毒型考马氏亮蓝染色液(GS1479)或高灵敏考马氏亮蓝染色液(GS1549)或通用型蛋白染色液(GS2027)进行染色。
  
• 使用后，请旋紧瓶盖防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
  
• 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。

• 对于悬浮培养的细胞或用细胞刮刮下的贴壁细胞，取培养细胞5×10⁶～1×10⁷个，将细胞及培养液移至离心管中，4℃，500g离心10min，弃去培养液，再向离心管中加入10mL预冷的1X PBS漂洗液，1000rpm离心5min，重复洗两次；
  
• 对于组织样本，将200mg组织剪切成小块，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，加入适量的预冷的1X PBS，4℃，700g (3000rpm)，离心3min，弃掉上清，重复清洗两次；
  
• 向以上收集的细胞或组织中加入1mL预冷的Buffer A(使用前每1mL的Buffer A中加入1μL DTT，10μL PMSF，1μL蛋白酶抑制剂和5μL磷酸酶抑制剂)，超声破碎细胞，每次30sec，3～4次，每次间隔1min，置于冰上冷却，超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％或将组织置玻璃匀浆器冰上均质30～50次至组织完全成匀质状液体无明显组织小块。
  
• 将破碎后的细胞液或组织匀浆液涡旋振荡10sec，冰上静置20min，期间取出振荡3～5次，再于4℃，12000rpm (12830g)离心10min，上清为胞质蛋白部分，分装并保存于-80℃，避免反复冻融。
  
  • 对于沉淀，可用250μL的Buffer A清洗1～2次，再进行步骤5，以减少残留的胞质蛋白对下游提取的污染。
    
  • 为减少膜蛋白及核蛋白对胞质蛋白的污染，可以将步骤4中的离心时间延长到20～30min。
• 在沉淀中加入500μL预冷的Buffer B(使用前向每1mL的Buffer B中加入1μL DTT，10μL PMSF，1μL蛋白酶抑制剂和5μL磷酸酶抑制剂)，涡旋振荡10sec，在冰上静置10min，期间取出振荡2～3次，再4℃，12000rpm (12830g)离心10min，取上清，作为核蛋白部分，分装并保存于-80℃，避免反复冻融。
  
  • 对于沉淀，可用250μL的BufferA进行清洗1～2次，再进行步骤6，以减少残留的核蛋白对下游提取的污染。
    
  • 为减少膜蛋白对核蛋白的污染，可以将步骤5中的离心时间延长到20～30min，以便于膜蛋白的充分沉降。
• 在离心沉淀物中加入500μL预冷的Buffer C (使用前向每1mL的Buffer C中加入1μL DTT，10μL PMSF，1μL蛋白酶抑制剂和5μL磷酸酶抑制剂)，涡旋剧烈振荡(涡旋仪调到最大转速)10sec，超声破碎10sec，再置于摇床中冰浴10min，期间取出振荡2～3次，再4℃，12000rpm (12830g)离心10min；
  
• 尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管中即得膜蛋白，分装并保存于-80℃，避免反复冻融。